摘要:
【摘要】 目的 建立快速检测硬糖中诱惑红色素的高效液相色谱法方法 采用Agilent-ZORBAXSB-C18 5μm 4．6×250mm色谱柱，流动相甲醇-0．02mol／L乙酸铵，流速1．0ml／min,波长254nm，梯度洗脱。结果 线性关系良好r=0．9995，回收率90．3%～95．6％，变异系5．99％，最低检出量0．0012mg／ml。结论 以高效液相色谱检测诱惑红色素，操作方便，快速，准确度高。
【关键词】 诱惑红;高效液相色谱;硬糖
诱惑红人工合成色素作为食品添加剂常被用于食品生产加工，它可以增加食品美观和提高人们的食欲，但使用过量会对人体产生有害作用，因而我国规定了诱惑红使用限量和检测方法，由于国标方法是纸色谱法，操作上比较繁琐，本文是采用高效液相色谱对硬糖中人工合成色素诱惑红进行分离检测，得到了满意结果。
1 材料与方法
1．1 仪器与试剂
HP1050液相色谱仪，二极管阵列检测器，自动进样器，四元泵及化学工作站，戴安Easy pure RF纯水机。色谱纯甲醇，诱惑红色素，所用实验用水均经纯水机处理，其余试剂均为分析纯。
1．2 诱惑红标准溶液
准确吸取0．1000g诱惑红，加水溶解，并定容至100ml，即得1．0mg／ml。诱惑红标准使用溶液：临用将诱惑红标准溶液加水稀释至 0．020mg／ml。
1．3 色谱柱与色谱条件
采用Agilent-ZORBAXSB-C18 5μm 4．6×250mm色谱柱。实验条件：检测波长254nm，流动相为甲醇-0．02mol／L乙酸铵，梯度洗脱：甲醇-0．02mol／L乙酸铵5：95，5min后甲醇：0．02mol／L乙酸铵25：75，维持10min，流速1．0ml／min［1～2］。
1．4 样品处理
称取已粉碎的硬糖样品10．0g，加30ml的水，温热溶解，用柠檬酸溶液调至pH4(按国标法提取)，经0．45μm针头式过滤器过滤进样［3～4］。
1．5 测定
取相同体积诱惑红标准使用液分别进样，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
1．6 计算
X=h2h2×c×Vm
X：样品中诱惑红的含量，g／kg
h1：样品峰面积(或峰高)
h2：标准峰面积(或峰高)
c：诱惑红色素的浓度mg／ml
m：样品取样量g
V：样品的定容体积ml。
2 结果
2．1 标准曲线线性关系实验
分别配制浓度为5．0、10．0、15.0、20．0、25．0、30.0μg／ml标准。进样10μl进行高效液相色谱分析，用峰面积与浓度进行线性回归，回归方程 Y=24．4752x-16．3617，相关系数r达到0．9995，表明标准曲线的线性关系良好。
2．2 最低检出测量
对浓度相对较低的标准样进行7次的检测，用其峰面积计算标准差，以3倍标准差，计算出最低检出量：0．0012mg／ml。
2．3 精密度实验
取一定浓度诱惑红标准溶液制成模拟样品，并进行10次测定求出标准偏差。相对标准偏差为5．99％，相对标准偏差小于8％。表明本法精密度良好。
2．4 回收率实验
将一个含有诱惑红色素的样品精密称取后，分别加入诱惑红标准，使其制成低、中、高三个浓度的加标样品，其加标浓度为0．005、0．020、0．050mg／ml，每个浓度取10个平行样，经前处理后过滤(0．45μm针头式过滤器)，用高效液相色谱仪分析，测得平均回收率(％)分别为：90．3%、95．4%、95．6%，回收率良好，保留时间(7.7min)适中(见图1)，背景吸收小，基线平稳，干扰少。
3 讨论
3.1 由于国标法中食品中的诱惑红测定采取纸色谱法，结果比较粗略，而相关诱惑红的检测报道比较少见，因此本文采用高效液相色谱法，结合高效液相色谱，既可分离干扰，又可准确定量。经选择后，建立的方法，采用流动相为甲醇-0．02mol／L，流速1．0ml／min，波长245nm，梯度洗脱分析后，线性关系良好，精密度、准确度及最低检测量等均符合标准方法的研制的要求。
3.2 诱惑红作为红色色素添加在糖果中比较常见，而液相色谱仪又比较普及，用液相色谱检测人工色素，可操作性强，因此，本方法可行性比较强，便于推广使用。
【参考文献】
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(来源：中国热带医学)