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HPLC法对三种食品添加剂的应用


                                HPLC法对三种食品添加剂的应用

                                            蔡宇春

                         (梧州市产品质量监督检验所,广西 梧州 543001)

摘 要:本文旨在建立一种快速测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的高效液相色谱法。本方法以YWG-C18柱,甲醇:乙酸铵为流动相,研究其三种物质的色谱分离特性,并对食品样品的前处理方法进行探讨。经实践得到了快速、有效的分离和样品处理方法。该方法测定的三种物质浓度在0~0. 100mg/ml之间呈线性关系,相关系数在0.999以上,证明该法准确度高、重现性好。应用于多种食品样品的测定,结果令人满意。

关键词:高效液相色谱法;苯甲酸;山梨酸;糖精钠

中图分类号: O657 文献标识码:A 文章编号: 1009-8143(2008)03-0073-03

随着人们生活水平的不断提高,人们对食品的要求越来越高,厂家为增加食品保存时间及口感,常在食品中添加适量防腐剂、甜味剂。食品中防腐剂和甜味剂的测定方法有紫外分光光度法、气相色谱法及薄层色谱法等[1]。国标检测方法有高效液相色谱法[2, 3],但使用其推荐的色谱条件时,色谱分离的时间太长,不利于常规的实验室分析;同时国标法中,测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠的高效液相色谱法中,样品处理只是提到了汽水、果汁类和配制酒类等液体制品的样品,而对于其它的样品处理方法没有提及。样品前处理是仪器分析的前提和关键。

我们选用了一种粒径更小的C18不锈钢柱进行研究,寻找到一种更为快速有效的分离方法,同时对国标方法中没有提到的样品类型的样品前处理进行探讨和实验。

1 材料与方法

1. 1 仪器与试剂

LC-5500高效液相色谱仪,二极管阵列检测器;梅特勒-托利多电子天平, Labconco90008-01超纯水仪。色谱纯甲醇,经纯水机处理的纯净水,所用标准物均从国家标准物质研究中心购得。

山梨酸标准液: 1. 00g/L,称取山梨酸固体标准0. 1000g,加入20g/L碳酸氢钠溶液5m,l加热溶解,定容至100m;l苯甲酸标准液: 1. 00g/L,称取苯甲酸固体标准0. 1000g,加入20g/L碳酸氢钠溶液5 m,l加热溶解,定容至100m;l糖精钠标准液: 1. 00g/L,称取经120℃烘干4h后的糖精钠固体标准0.0851g,加水溶解,定容至100ml。

标准混合液: 0. 10g/L,取三种标准液各10.0mL于100mL容量瓶中,加纯水至刻度。

实验所用甲醇和混标溶液均经0. 45μm滤膜过滤。其余试剂均为分析纯试剂。

1. 2 色谱条件

色谱柱:YWG-C18不锈钢柱(10μm, 250mm×4. 6mmID),柱温为室温;进样量10μL;检测波长:

230nm;流动相:甲醇+0. 02mol/L乙酸铵(5+95);

流速: 1. 0ml/min。以保留时间和吸收光谱定性,以色谱峰峰面积定量。

1. 3 样品前处理

1. 3. 1 对于碳酸饮料、果汁及果汁饮料、茶饮料等直接或稀释后经0. 45μm针头式过滤器过滤进样。含二氧化碳的应先加热或利用超声波驱除二氧化碳。对于果冻类样品可以采取果冻中的液体部分,直接或稀释后过滤、进样。

1. 3. 2 对于固体样品,将样品粉碎、混匀后称取5.0g于50ml具塞比色管中,加少量水溶解浸泡,加入1. 0mol/L的NaOH溶液1. 0m,l放置过夜或于超声波清洗器中超声振荡15min后加水定容至刻度。

1. 3. 3 对于含蛋白质多的样品在1. 3. 2的基础上加入10. 6%的亚铁氰化钾和21. 9%的乙酸锌各2.0ml后再定容至刻度,静置0. 5h以上。

1. 3. 4 对于含油脂较多的食品,可以采用正己烷萃取,脱去样品中油脂,一般情况下均不需要。将浸泡、沉淀后的样品溶液用滤纸初步过滤后再用0.45μm的滤膜过滤,备用。

2 结果分析

2. 1 色谱条件的选择

为了在短时间内提供快速的分离,本文选用了一种粒径比国标推荐方法更小的5μm填料的C18柱来分离3种物质。实践中发现,在同样的甲醇比例下, 3种物质可以很快地出峰。

2. 1. 1 通过观察甲醇含量对分离的影响,发现在甲醇含量为5%时有较好的分离度和合适的保留时间,我们最终选择甲醇与0. 02mol/L乙酸铵的比例为5: 95。

2. 1. 2 同时在实验中发现,如果柱子长时间未用,或平衡时间尚不充分时会出现糖精钠和山梨酸的峰位置颠倒现象。如果是采用二极管阵列检测器的多个波长检测时就会很容易识别,因为山梨酸的灵敏度在波长254nm比在波长230nm时明显要高得多,而在230nm时两者有相近的灵敏度,往往不容易发现。

2. 2 标准曲线的绘制

分别取0, 0. 0020, 0. 0050, 0. 0100, 0. 0500, 0.1000g/L标准混合溶液20μL进行测定,以浓度和峰面积进行标准曲线绘制,回归方程的相关系数均大于0. 999。苯甲酸、山梨酸、糖精钠的检出限分别是5, 3和15μg/L,色谱图见图1。



2. 3 准确度实验

按照本文所列的方法对国标中没有列明的样品种类进行了加标回收实验,测定结果如表1。表1加标回收实验结果。



2. 4 重复性实验

取粉碎混匀的饼干样品,分别称取8份相同质量的样品,分别加入3种标准混合溶液适量,按照1. 3. 2中所列的样品前处理方法处理后测定。3种成分测定的相对标准偏差分别为苯甲酸3. 52%、山梨酸2. 86%、糖精钠4. 75%,测定结果的偏差均在允许的范围内,说明经过该种方法处理后测定的重现性良好。

3 结论

在实际工作中,面对大批量的样品急需检验时,选择一种快速高效的测定方法尤显重要。上述方法能快速地分离苯甲酸、山梨酸、糖精钠三种添加剂,而且只需5%的甲醇比例就可以在较短时间内完成分离测定食品中三种食品添加剂的工作。该方法精密度、准确度及灵敏度均符合卫生检验分析的要求,大大提高检测食品中三种添加剂的工作效率。

参考文献

[1]GB/T5009. 28-2003.食品中糖精钠的测定方法[S].

[2]GB/T5009. 29-2003.食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法[S].

[3]翟永信.现代食品分析手册[M].北京:北京大学出版社, 1988, 379~393.

[4]仲岳桐.高油脂食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠样品前处理的方法改进[ J].中国卫生检验杂志, 2001, 11(4):471.

[5]建民,卢建华. HPLC法测定牛乳及蜜饯中苯甲酸、山梨酸、糖精钠的试样处理方法[ J].中国公共卫生, 2002,18157: 612.(来源:食品添加剂应用网)

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