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HPLC法检测乳制品中2种甜味剂和3种防腐剂

    0· 引言
    苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸是常用的食品防腐剂，由于其既能抑制多种微生物繁殖，又具良好的杀菌作用，被广泛应用于罐头、果酱、汽水、乳制品和肉制品中[1-6]。糖精钠和安赛蜜为人工合成甜味剂，由于低热量和高甜度等优点，被广泛用于干果、糕点、饮料和雪糕等食品中。据研究报道每日摄取少量的防腐剂和甜味剂对人体没有危害，但是过量时却会对人体的脏器造成危害，甚至有得癌症的隐患，特别是对老人、孕妇、小孩危害更为严重[7-12]。因此国内外对防腐剂和甜味剂的最大使用量有严格的规定，我国也出台了相应的检测标准[13-16]，但不能同时检测以上5种物质，如果全部检测耗时、费力。为了方便乳制品中防腐剂和甜味剂日常监测， 本文建立了同时测定以上5种物质的检测方法，该方法快速、操作简单、成本低、重复性好，满足对乳制品中多种甜味剂和防腐剂同时监测的要求。
    1 ·实验
    1.1 材料
    甲醇（色谱纯）；乙酸胺（色谱纯）；乙酸铅（优级纯）；草酸钾（优级纯）；磷酸氢二钠（优级纯）；氢氧化钠(优级纯)；碳酸氢钠(优级纯)。安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸标准品。
    1.2 仪器与设备
    液相色谱仪（Agilent 1260）带紫外检测器，分析天平，振荡器。
    1.3 溶液的配制
    安赛蜜标准储备溶液：准确称取0.1000 g安赛蜜，用水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成安赛蜜质量浓度为1 g/L的储备溶液。
    糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851 g经120 ℃烘干4 h后的糖精钠， 加水溶解并定容100 mL容量瓶中，配制成糖精钠含量1 g/L的储备溶液。
    苯甲酸和山梨酸标准储备溶液：准确称取标准物质各0.1000 g，加5 mL碳酸氢钠溶液(20 g/L)，加热溶解，加水定容100 mL容量瓶中，配制成苯甲酸和山梨酸质量浓度分别为1 g/L的储备溶液。
    脱氢乙酸标准储备液： 准确称取0.1000 g脱氢乙酸标准品，用10 mL质量浓度为20g/L的氢氧化钠溶液溶解，用水定容100 mL容量瓶中，配制成脱氢乙酸质量浓度为1 g/L的储备溶液。
    乙酸铅溶液：称取乙酸铅200 g，溶解于1 000 mL水中。
    草酸钾—磷酸氢二钠溶液：称取草酸钾30 g，磷酸氢二钠70 g，溶解于1 000 mL水中。
    1.4 色谱条件
    测定波长：230 nm； 色谱柱为Welch AQ－C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速为1.0 mL/min；进样量：20 uL；柱温为25 ℃；流动相：A为甲醇，B为乙酸胺水溶液（浓度为0.02 mol/L），A在0～20 in质量分数由15%变为45%，20.01 min变为15%，20.01～30 min保持15%。
    1.5 样品处理
    液态奶、酸奶和冷饮样品：称取15 g样品于50 mL容量瓶中，加乙酸铅和草酸钾磷酸氢二钠溶液各4 mL，加水定容,振荡混匀,静止数分钟，用干燥滤纸过滤,再经滤膜(0.45 μm)过滤，上机。
    乳饮料样品：称取15 g样品于50 mL容量瓶中，加乙酸铅和草酸钾磷酸氢二钠溶液各10 mL，加水定容,振荡混匀, 静止数分钟， 用干燥滤纸过滤, 再经滤膜(0.45 μm)过滤，上机。
    1.6 结果计算
   
    式中：X为试样中被测物质的质量分数(μg/g)；C为由标准曲线得到样品溶液中被测物质质量浓度(mg/L)；V为样品溶液定容体积(mL)； m为称取样品的质量(g)。
    2 ·结果分析
    2.1 标准曲线及谱图
    安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸标准工作液： 将标准储备液用水依次稀释成质量浓度为1.0， 2.0，5.0，8.0，10.0 mg/L的系列标准工作溶液，溶液经0.45 μm滤膜过滤，上机测定。
    图1为甜味剂和防腐剂混合标准品的色谱。由图1可以看出，5种物质完全分离， 保留时间分别为：5.701，8.128，15.847，19.930，20.951 min。
   
    图2为牛奶样品加入5种混标的色谱。由图2可以看出，5种物质与杂质峰完全分离，无干扰，可准确定性、定量检测。
    甜味剂和防腐剂标准曲线和线性关系如表1所示。由表1可以看出，5种物质浓度和峰面积呈线性关系，相关系数均大于0.9980。
   
    2.2 回收率和精密度实验
    在液态奶、酸奶和冷饮的空白样品中加入不同浓度的甜味剂和防腐剂，平行测定3次，得出回收率结果如表2所示。
   
    由表2可以看出， 本方法测定不同乳制品中安赛蜜回收率为92.0%～117.7%， 变异系数2.26%～6.37%；糖精钠回收率为91.9%～99.5%，变异系数2.96%～5.89%；苯甲酸回收率为89.8%～105.7%，变异系数2.21%～5.69%；山梨酸回收率为93.6%～100.7%，变异系数2.55%～5.57%；脱氢乙酸回收率为80.0%～96.3%，变异系数2.34%～6.85%；5种物质均可达到分析要求。
    2.3 线性范围和检出限
    本方法中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的定量检出限为1 mg/kg，线性范围1～100 mg/kg。
    3· 结论
    在本方法的条件下，5种防腐剂和甜味剂与乳制品其他干扰杂质峰完全分离， 可以准确定量检测，该方法操作简便、快速，回收率和重复性均符合要求，可以节约检测成本并提高检测效率，适合乳制品中防腐剂和甜味剂的日常监控。

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