同时测定调味品中合成色素、防腐剂及抗氧化剂
在食品生产直至销售整个过程中，为了提高食品品质，达到色、香、味俱佳的效果及防腐保鲜目的，离不开食品添加剂，但违法添加和滥用会给人体健康和食品安全造成极大威胁。
苏丹红及对位红均属于偶氮类化工合成染料，其芳香结构在人体内被降解为芳香胺，被人体吸收后，对人体具有刺激性，甚至出现遗传毒性致癌［１］，禁止用于食品加工生产中，然而，食品包括调味品中违法添加这些化工染料的事件时有发生。
对羟基苯甲酸丁酯（ＢＰ）、２，６二叔丁基对甲酚（ＢＨＴ）及４－己基间苯二酚（４ＨＲ）是调味品中常用的防腐剂和抗氧化剂，这三种均属国家允许但限量使用的食品添加剂，超标或滥用对人体存在一定危害。国家标准［２］对防腐抗氧化剂的使用量有明确的规定。
食品中人工色素或防腐抗氧化剂的残留检测通常采用气相色谱［３］、高效液相色谱［４－７］、气质联用［８］、液质联用［９］等。国内外单独测定人工色素或防腐抗氧化剂的相关报道很多，但同时检测这两类化合物的方法尚未见报道。
欧盟［１０］采用大量乙腈（１００ｍＬ）萃取，不经净化直接进ＨＰＬＣ分析，对柱效和柱的寿命损害较大，ＪｉａｎｇＹ等［１１］采用乙腈低温萃取净化，ＨＰＬＣ－ＭＳ测定菜籽和菜籽油中农药多残留。本文采用少量乙腈超声萃取，离心冷冻、提取与净化被测组分，建立了同时测定腐乳及海鲜酱中人工色素、防腐剂及抗氧化剂的高效液相色谱方法，结果令人满意。
１ 试验
１．１ 仪器及试剂
岛津ＬＣ－１０ＡＴ 液相色谱仪；７７２５ｉ型手动进样阀；ＳＰＤ－１０Ａ 紫外检测器；Ｎ－２０００型双通道色谱工作站 浙江大学智能信息工程研究所；ＳＺ－９３自动双重纯净水蒸馏器 上海亚荣生化仪器厂；旋涡混合器；电动离心机。
对位红（ＰＲ） 德国Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司；苏丹红Ⅰ号（ＳｕｄａｎⅠ）、尼泊金丁酯（ＢＰ）、２，６二叔丁基对甲酚（ＢＨＴ）、４－己基间苯二酚（４ＨＲ） 瑞典ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｉｃｓ公司。甲醇和乙腈均为色谱纯，所用水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯，样品购自当地超市。
标准储备溶液：准确称取５种标准品，其中对位红、苏丹红Ⅰ 号用少量氯仿溶解后，乙腈定容为１ｍｇ／ｍＬ；其余用甲醇溶解，配成浓度均为１ｍｇ／ｍＬ的标准储备液，４℃储藏备用。用甲醇∶乙腈为１∶１逐级稀释标准储备液，配制系列工作溶液。
１．２ 色谱条件
色谱柱：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ Ｃ１８柱（５μｍ，２５０×４．６ｍｍ）；
柱温：室温；流动相：甲醇∶乙腈∶水为１１∶６２∶２７（Ｖ／Ｖ，甲酸调ｐＨ ３．６）；波长程序：０．１～１６ ｍｉｎ：２２６ｎｍ，１６～２８ｍｉｎ：４８４ｎｍ，２８～３５ｍｉｎ：２２６ｎｍ；进样量：１０μＬ。
１．３ 样品处理
准确称取混匀的待测调味品（腐乳、海鲜酱）１．０ｇ，加入３．０ｇ经马弗炉３００℃灼烧过的无水硫酸镁，再加入０．５ｇ无水氯化钠，于研钵中研磨均匀，混匀后，转移至具塞尖底离心管中，加入９．０ｍＬ乙腈于旋涡混匀器上振荡１ ｍｉｎ，超声萃取１０ ｍｉｎ，３５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，置于－１８℃冰箱中冷冻２ｈ，上清液经０．４５μｍ 滤膜过滤，取２ｍＬ滤液经微氮气流吹至０．１ｍＬ，取１０μＬ进样分析。
２ 结果与讨论
２．１ 流动相和波长的选择考察了不同比例的甲醇－乙腈－水体系及不同ｐＨ值的流动相出峰情况。当甲醇－乙腈－水体积比为１１∶６２∶２７，甲酸调节ｐＨ ３．６时，五组分分离效果好，保留时间在３５ｍｉｎ内，实验采用紫外－可见检测器变波长测定，考察了不同波长下测定情况，最终确定为０．１～１６ ｍｉｎ：２２６ｎｍ，１６～２８ ｍｉｎ：４８４ｎｍ，２８～３５ｍｉｎ：２２６ｎｍ条件下，各组分总体响应较好，基线稳定。采用色谱峰保留时间定性，外标法峰面积定量。标准溶液色谱图见图１。
２．２ 萃取条件优化 ２．２．１ 萃取剂的选择
乙腈对所测五组分有良好的溶解性，是萃取所测组分较为理想的萃取剂，故采用乙腈为萃取剂，考察了萃取剂用量对目标组分回收率的影响情况，结果表明：乙腈的体积为９ｍＬ时，各组分回收率最高，见图２。
２．２．２ 盐效应
实验采用加入无水硫酸镁研磨样品，可有效分散样品，脱水及去除水溶性杂质。加入ＮａＣｌ，目标化合物的萃取效率显著提高，ＮａＣｌ的量不同影响程度亦不同，见图３。最终选择１ｇ样品，加入３．０ｇ无水硫酸镁，０．５ｇ ＮａＣｌ。
２．２．３ 冷冻时间
低温冷冻萃取，可大幅度降低或去除脂溶性杂质的干扰，集萃取、净化为一体。冷冻与否对萃取效果影响较大，冷冻条件下，萃取效率较高。但冷冻时间超过２ｈ对萃取效率影响甚微，综合考虑，选择冷冻２ｈ。
２．３ 线性方程及检出限
用标准储备溶液逐级稀释配成一系列浓度的工作液，在所选的色谱条件下，以Ｙ（峰面积）对Ｘ（质量浓度）绘制工作曲线，５组份的线性方程、相关系数及方法检出限见表１。
２．４ 样品加标回收率及ＲＳＤ
于１ｇ样品（腐乳、海鲜酱）中，加入适量标准品，在最佳萃取条件和色谱条件下，测定加标后５组分的含量，平行测定６次，计算相应的回收率和ＲＳＤ，结果见表２，样品加标色谱图见图４。
２．５ 实际样品测定
取１ｇ样品（腐乳、海鲜酱），在最佳萃取条件和色谱条件下测定，平行测定３次，实际样品色谱图见图５和图６，五组分均未检出。
３ 结论
采用乙腈冷冻离心萃取－高效液相色谱测定调味品中人工色素、防腐抗氧化剂，样品处理集萃取、净化为一体，操作简便、高效，适合于调味品中这两类物质的测定。