中草药凉茶中甜味剂的液相色谱测定法
凉茶为具有凉性的中草药汤液，是指将药性寒凉或能消解内热的中草药煎水作饮料喝，以消除春、夏、秋季人体内的湿热或实热之气或减缓冬日干燥引起的喉咙疼痛等疾患，已形成各式各样的凉茶产品，在我国广东、广西、福建等地许多人都养成了喝凉茶的习惯。为了让消费者普遍接受凉茶的口感，一般都加入蔗糖，蜂蜜，甜菊糖等天然甜味剂调成甜味，不少商家为节约成本加入如乙酰磺胺酸钾( 安赛蜜) 、糖精钠、天门冬酰苯丙氨酸甲酯( 甜蜜素) 等人工合成甜味剂调配［1］。天门冬酰苯丙氨酸甲酯的甜度为蔗糖的170 倍，其甜味与蔗糖相似，并具有清凉感，在食品工业中用于制造饮料、糖果，在药剂中用于内服液体制剂，但是对于有苯丙酮尿症的病人和婴幼儿应谨慎使用，《中国药典》( 2005 版) 规定其用量为0． 1% ～ 1． 0%［2］。食品中甜味剂的测定是食品卫生检验领域的一项常用检测工作，其测定方法已有许多报道，部分项目已有国家标准方法［3-4］。针对食品中食品添加剂混用现象突出的特点，我们参考有关食品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠、天门冬酰苯丙氨酸甲酯的测定方法及相关文献［5-6］拟寻求适宜于中草药凉茶中甜味剂测定采用多组分同时分析的高效液相色谱( HPLC) 法。
1 ·材料与方法
1． 1 仪器与试剂
美国Agilent 1100 高效液相色谱仪，其中包括四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器、真空在线脱气机和柱温箱。乙酰磺胺酸钾( 安赛蜜) 、糖精钠、阿斯巴甜标准品由中国计量科学研究院提供，安赛蜜和阿斯巴甜为进口( 德国) 标准品，甲醇( 色谱纯) 、乙腈( 色谱纯) 、磷酸二氢钠为国产分析纯，实验用水为超纯水。
1． 2 色谱条件
色谱柱: AgilentTC-C18，4． 6 × 250mm，5 μm。流动相: A: 乙腈B: 20 mmol /L 磷酸二氢钠，磷酸调节pH 值至2． 5，时间: 0 min A15%，B 85%;8 min A 30%，B 70%; 12 min A 85%，B 15%。流速:1 ml /min，柱温: 30 ℃，检测波长: 214 nm，进样量: 20 μl。
1． 3 样品处理
1． 3． 1 液体样品
准确吸取2 ml 样品，用流动相稀释至10 ml，混匀，经滤膜( 0． 45 μm) 过滤后备用。
1． 3． 2 固体样品
准确称取1． 0 g 样品，加水溶解，定容至10 ml ，以下处理同1． 3． 1。
1． 4 标准溶液配制
精密称取安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜标准品，用流动相配置成浓度为1 mg /L 的标准储备液，根据需要再用流动相稀释配制成工作曲线。
2· 结果
2． 1 线性关系的试验
在选定的色谱条件下，分别进样测定。所有测试标准品进样浓度线性范围均为8 ～ 200 μg /ml，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标做线性回归，回归方程见表1。色谱图见图1。
2． 2 最低检出限和最低定量限
根据实验室的具体情况和仪器最低检出限限量的要求，本法连续测定一种浓度标准溶液20 次，求出相对偏差( SA) ，工作曲线的斜率为灵敏度( S) 。2 SA /S 为最低检出限，10 SA /S为最低定量限，见表2。
2． 3 精密度试验
将配置好的混合标准使用液，进样20 μl，每个浓度连续测定6 次，结果ＲDS 均在1． 81%以下，表明仪器精密度良好。见表3。
2． 4 加标回收试验
随机抽取1 个样品为空白，分别加入3 个不同浓度水平的甜味剂混合标准品适量，进行加标回收试验，计算回收率。见表4。可见本法回收率在90． 5% ～ 107． 4%，具有理想的回收率。
2. 5 市售样品检验结果
随机抽查了市内部分凉茶铺、中药店所售凉茶饮料及部分中药合剂和固体凉茶冲剂共215 份样品，按上述方法进行3 种甜味剂的含量分析测定，每个样品平行测3 次，各检出数如下: 安赛蜜85 份，糖精钠110 份，阿斯巴甜50 份; 其中添加1种甜味剂的有75 份，添加2 种的有75 份，添加3 种的有10 份。由上述结果得知: 中草药凉茶种普遍加了添加剂，大多数添加1 ～ 3种，但含量大都低于0． 1mg /kg;检出添加了甜味剂的儿童中药合剂中，其甜味剂含量均大于0． 1 mg /kg，固体凉茶冲剂中儿童使用的甜味剂亦大于0． 1 mg /kg，部分还大于0． 50mg /kg，有些甚至大于1． 0 mg /kg，其余大部分结果均符合植物性饮料中甜味剂的限量要求。见表5。
3 ·讨论
采用HPLC 测定中草药凉茶中甜味剂的测定方法，该方法测定灵敏度高，稳定性好，简便易行，3 种被测组分色谱分离效果较好、回收率好，达到90． 5% ～107． 4%，精密度测定结果均＜ 1． 81，完全满足仪器实际工作需要。从市售样品调查结果来看，儿童使用的中药合剂及固体凉茶冲剂中甜味剂含量较高，长期服用可能对身体造成伤害，这可能因小孩畏苦，而特意增大了添加量。因此建议: ①相关监测部门应对此引起重视，并重点监测儿童中药合剂和固体凉茶冲剂。②该类样品还属于监测盲点，有关监测及执法部门应加强对相关企业的监督和管理，在保证药效同时，也要保证患者的健康与安全，不要造成二次伤害。③相关监督管理部门应定期检查和抽检凉茶铺，避免添加剂添加的随意性，减少添加剂的使用，依法查处坑害消费者的不法行为。
该方法控制中草药凉茶中几种甜味剂，方法简便易行，精密度良好，还可推广至药物及其他食品检验。